Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)

Sistema de bombeo

Requisitos:

• Caudales sin pulsaciones que afecten al desplazamiento de la fase móvil.
• Debe ser regulable para que el caudal alcance valores comprendidos entre 0.1 y 10 ml/min.
• Debe estar hecho de un material no corrosivo.

Tipos:

• Bombas recíprocas o de vaivén
• Bombas neumáticas o de presión constante
• Bombas de desplazamiento tipo jeringa

Sistema de inyección

Las válvulas de inyección son, básicamente, una jeringa unida a una válvula de seis guías conectada a un motor que le proporciona la potencia necesaria.

Columnas

Las columnas más comunes son de acero inoxidable. Su longitud oscila entre 10 y 30 cm, tienen un diámetro aproximado de 5 mm y el tamaño de partícula que soportan va de 2 a 10 nanómetros. Las más usadas son las C18, que utilizan partículas de sílice hidrolizadas cubiertas de siloxano.

Detector

El detector a emplear depende de la naturaleza de la muestra y debe tener las siguientes características:

• Respuesta continua, lineal y rápida para un intervalo amplio de concentración de las especies a analizar.
• Alta sensibilidad y bajo ruido.
• Pequeño volumen en la zona de medida de la muestra para evitar la dispersión de solutos.
• Insensible a cambios aleatorios en las condiciones operatorias.

Los detectores más comunes son UV/Vis, fluorescencia, índice de refracción y MS (espectrometría de masas).

Aplicaciones de la HPLC

La HPLC tiene aplicaciones en diversas áreas como:

• Fármacos: análisis de antibióticos.
• Bioquímica: estudio de proteínas.
• Productos de alimentación: determinación de antioxidantes.
• Medio ambiente: detección de contaminantes como pesticidas.