Coloración y tinción basica de muestras

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TINCIONES GENERALES: Los colorantes son normalmente hidrosolubles y se caracterizan por unirse a ciertas moléculas presentes en los tejidos gracias a afinidades químicas. Se realizan habitualmente sobre secciones de tejido, siendo las más utilizadas las secciones obtenidas a partir de inclusiones en parafina u obtenidas en el criostato. Son moléculas que poseen tres componentes importantes: un esqueleto incoloro, que normalmente es un anillo aromático de benceno, al cual se le unen dos tipos de radicales: uno que aporta el color, denominado cromóforo otro que posibilita la unión a elementos del tejido denominado auxocromo Al conjunto de estos tres elementos unidos en una molécula se denomina cromógeno.
Según la naturaleza química del cromóforo hay varios tipos de colorantes:Nitrosos, Ozoicos, Derivados de la antroquinona, Derivados de la acridina, Derivados de iminas quinónicas, Derivados de difenilmetano (auramina) y trifenilmetano (fucsinas, verde ligero), Derivados del xanteno  y Derivados de las ftalocianinas.

Según la naturaleza química del radical auxocromo los colorantes se clasifican en: Ácidos: son moléculas ácidas que tiñen estructuras básicas, como, por ejemplo: el citoplasma, está la eosina, eritrosina, naranja ácida (oranje), verde brillante o verde

luz, fucsina ácida. Básicos: son moléculas básicas que tiñen estructuras de tipo ácido como los ácidos nucleicos. Dentro de este grupo están la fucsina básica, azul de metileno, azul de toluidina, verde de metilo, etc… Neutros: son sales cuya propiedad colorante va unida tanto al colorante básico como al ácido y son el eosinato, azul de metileno, panóptico rápido. Indiferentes: diferente solubilidad (característica física); no tiñen por unión de una molécula u otra sino que son solubles a la sustancia que tiñen.

Básicos: son sales en las que la base aporta el color, mientras que la parte ácida es incolora. Tienen apetencia por sustancias ácidas del tejido como el ADN o ciertos componentes de la matriz extracelular como los glucosaminoglucanos. Así, ponen de manifiesto el núcleo y el ARN, sobre todo el ARNr presente en los ribosomas por ser muy abundante, así como ciertas matrices extracelulares ricas en componentes ácidos. Ejemplos de colorantes básicos son la tionina, safranina, azul de toluidina, el azul de metilenoo la hematoxilina .Ácidos: son sales con el anión coloreado y la base incolora. Tienen apetencia por sustancias básicas, sobre todo estructuras proteicas localizadas en elcitoplasma celular y también el colágeno de la matriz extracelular.Ejemplos de colorantes ácidos son la fucsina ácida, verde rápido, naranja G o la eosina.Neutros: poseen una porción ácida y otra básica, ambas con capacidad para aportar color.Por tanto un mismo colorante puede teñir tanto las partes básicas como las ácidas de lostejidos.Por ejemplo, el eosinato de azul de metilenoIndiferentes: realmente no se unen a elementos de los tejidos por afinidad química sinoporque se disuelven en ellos. Por ejemplo, el colorante sudán se disuelve en los lípidos y por tanto teñirá a las gotas de lípidos, especialmente en los adipocitos. Cuando el colorante unido al tejido tiene el mismo color que en solución se denomina ortocromasia. Cuando un colorante se une al tejido y refleja un color diferente al que tiene en solución se dice que ha ocurrido un fenómeno de metacromasia.  Esto se debe a que las propiedades de absorción de la luz del colorante cambian al unirse a componentes celulares. Dibujo esquematico de la metacromasia, agregación de las moléculas colorantes sobre superpie de un polimero de alto peso molecular




MÉTODOS DE COLORACIÓN: Coloración directa: Se denomina así a la tinción que se ejerce sobre células y tejidos cuando éstos se ponen en contacto con la solución colorante, el resultado indica una verdadera afinidad entre el tejido y el colorante. Ejemplo: la tinción de los núcleos por el azul de metileno. Coloración indirecta: Para que lleve a efecto la coloración es indispensable recurrir al empleo de sustancias intermediarias que faciliten la adhesión del colorante en las estructuras tisulares. La sustancia intermediaria que se utiliza se denomina “mordiente”. El mordiente se aplica antes de la utilización de la solución colorante o puede formar parte de ella. La combinación que se efectúa entre el mordiente y el colorante se denomina “laca”. La mayoría de las soluciones colorantes de hematoxilina requieren de un mordiente para que aquella proporcione color. Coloración progresiva: Se refiere a la marcha misma de la coloración. Los tejidos se ponen en contacto con la solución colorante para que, conforme transcurre el tiempo de coloración, el tejido, de manera progresiva, alcance la intensidad de tinción deseada; en ese momento se detiene la coloración mediante lavado y la eliminación del colorante sobrante. Coloración regresiva: En este caso los tejidos se sobrecolorean con el colorante para someterlos después a la acción de una sustancia denominada diferenciador, éste extrae parte del colorante y, mediante la observación al microscopio, se detiene el proceso de diferenciación cuando los componentes alcanzan la tinción deseada. Coloración simple: Es el procedimiento en el que se utiliza un solo colorante para teñir algún componente celular o tisular. Por ejemplo, teñir los núcleos con tionina. Coloración combinada: Consiste en la aplicación, a una muestra de tejido u órgano, de varios colorantes con la finalidad de destacar, mediante colores diferentes, estructuras específicas que forman parte de ella. Puede ser:  Simultánea, cuando en una misma solución de coloración se mezclan varios colorantes. En este caso los tejidos reciben la tinción en un solo evento, Ejemplos: las soluciones colorantes de algunos tricrómicos como el de Van Gieson (fucsina ácida y ácido pícrico) o el de Mallory (azul de anilina y naranja G) o el de Shorr ( verde brillante, fucsina ácida y naranja G).

Método de Mallory (tinción selectiva): Sucesiva, Consiste en aplicar a los tejidos soluciones sucesivas de varios colorantes, con la finalidad que ciertos componentes se tiñan con algunos de ellos. El ejemplo más demostrativo es la coloración de hematoxilina. eosina, en ella los núcleos se tiñen con la hematoxilina y después la eosina se encarga de colorear al citoplasma Coloración ortocromática. Es la acción de tinción que ejerce un colorante al colorear una determinada estructura con su propio color. La gran mayoría de los colorantes producen coloración ortocromática. Coloración metacromática. Es la tinción en la cual, un colorante además de ceder su propio color a una estructura celular o tisular también tiñe de color distinto a otras estructuras. La tionina y el azul de toluidina colorean de azul a los núcleos y a otras estructuras basófilas pero, al mismo tiempo, ciertos componentes tisulares como la mucina, la matriz cartilaginosa o el ácido hialurónico se tiñen de violeta o rosado. Coloración panóptica: es una coloración combinada realizada sucesivamente por colorantes neutros (May-Grünwald-Giemsa). Coloración pancrómica: Es producida por la actividad tintorial de los colorantes neutros. En este caso, las porciones básicas y ácidas ejercen su acción de tinción pero, además ciertos componentes celulares se tiñen de colores diferentes a los originales adquiriendo tonalidades que resultan de la mezcla de ellos.