Siembra de bacterias por agotamiento
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Fecha inicio: 21/11/2017
Equipo de trabajo: Andrea Rico, Claudia Polo y Halima Ayad
OBJETIVOS
Saber realizar técnicas de inoculación y siembra de microorganismos.
Determinar los parámetros de incubación para cada tipo de microorganismos.
Realizar aislamientos de UFC (Unidad formadora de colonias).
Describir, a nivel macroscópico, los cultivos celulares.
Aplicar técnicas de recuento bacteriano.
MATERIALES, APARATOS Y REACTIVOS
Mechero Bunsen
Asa de siembra
Placas petri
Tubos de ensayo
Micropipetas
Tubos TSA: 10 tubos
2 Tubos de agar inclinado
FUNDAMENTO
En primer lugar, toda técnica de aislamiento y cultivo llevada a cabo ha de tener lugar en un área de condiciones asépticas.
Para ello hay que trabajar cerca de la llama del mechero a un entorno de 20 cm.
Los tubos de ensayo han de flamearse cada vez que se abren o cierran. Y el asa de siembra ha de esterilizarse cada vez que se utiliza.
De este modo se evita el riesgo de contaminación o alteración de los cultivos.
Técnica de siembra
Siembra en medios líquidos, favorecen el crecimiento de microorganismos anaerobios ya que es más fácil la agitación.
Siembra en agar inclinado, dependiendo de si las colonias crecen en el principio o final indican unas u otras carácterísticas.
Siembra en superficie, determinación de la UFC (unidad formadora de colonias).
Siembra en profundidad, es necesario realizar movimiento circulares para homogeneizar la muestra.
Técnicas de aislamiento
Agotamiento de asa, método que mediante la realización de estrías permite la observación, en las últimas tres estrías, colonias aisladas. Ésto es debido a que el la muestra se encuentra más diluida en dichas estrías. Cabe destacar que es de gran importancia esterilizar el asa de siembra entre cada tres estrías, ya que se arrastran cada vez menos microorganismos.
Banco de diluciones, entre dilución y dilución ha de cambiarse la punta de la micropipeta de manera que se obtienen diluciones crecientes en las cuales se observan de más a menos (10^-5) colonias.
PROCEDIMIENTO