Tema 10. Citopreparación
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1. Métodos de obtención de muestras
M. directo: Muestra rica en células y con poco líquido. Directamente a frotis. Ej: PAAF, hisopos, asa de platino...
M. indirecto: Muestras líquidas pobres en células. Necesario centrifugar. Ej: Esputos, orina, aspirados bronquiales...
Se agrupan en 4 categorias:
-Estudio de células atípicas en secreciones líquidas
-Estudio de células atípicas después de raspado de mucosas
-Estudio de células tras una PAAF (célu l as en suspensión)
-Estudio de células de piezas operatorias ("intra")
2. Preparación de la muestra para estudio citológico
2.1. Tipos de muestra según procedencia
-Procedentes de líquidos fisiológicos (sangre, orina, LCR...)
-Procedentes de líquidos patológicos (pleura, peritoneal...)
-Procedentes de frotis legrados (frotis vaginal ó bronquial)
-Piezas operatorias
2.2. Preparación general de la muestra
Frotis fijados: Ya extendidos, fijados (citospray) e identificados. Directos a tinción. Ej: Secreciones mama
Frotis secados al aire: Ya extendidos, secados al aire e identificados. NO fijados. Tinción Romanowsky: 30 min a 110ºC + mezcla recién preparada de azul de metileno saturada y de eosina al 1%.Resultados: Núcleos violetas, eritrocitos rojos y Plasmodium azul
Muestras no fijadas ni secadas: Muestras frescas en forma de fluido, líquido o semisólido. Ej: Orina, esputos, LCR... Su procesamiento puede ser:
-Extensión directa: Muestras mucosas. Identificación de portas, aspecto macro, selección zonas patológicas y extender en los portas. Fijar con etanol 96% para Papanicolau o dejar secar al aire para Romanowsky, Giemsa o Diff-Quick.
-Centrifugación: Muestras seromucosas y líquidos serosos. Aspecto muestra, agitar muestra y verter en dos tubos de centrífuga, centrifugar a 2000rpm 5 min, quitar sobrenadante, resuspender las células y al porta
-Citocentrifugación: Citospyn. Tubo especial con forma de cono con orificio situado en un filtro. Junto al filtro el portaobjetos. Centrifugar a 1000-1500rpm 5 min. Retirar porta y fijar o dejar secar. P ara muy bajo nº de células en grande volúmenes.
-Filtros de membrana: Para orina, LCR, sinovial...Mejor que citocentrigugación. Filtro de mb con pors de 8-10 ì m. Más usado son Milipore (acetato de celulosa) y Nucleopore (policarbonato). Sobre todo filtros SM de 1 ó 2 ì m a 5 ì m. 80% poros. Se puede estimar el nº de células cancerosas por volumen de líquido dado. Filtrado a presión atmosférica o presión negativa de 25 mm Hg. Fijar con etanol º media.
3.1. Tipos de fijadores
-Fijadores alcohólicos: Rápidos aunque volátiles e inflamables:1. Etanol 96% para Papanicolau. 15-20 min. Ácido acético 2.5% para lisar hematíes. Para valoración homonal no añadir ácido acético. 2. Metanol 100%. 3. Propanol 90% 4. Alcohol-éter
-Líquido de Carnoy:
-Citospray: Aerosol de alcohol isopropílico + polietilglicol. Antes de teñir pases sucesivos de 5-10 min por etanol 96%.
4.1. Coloraciones para estudios citológicos
-Papanicolau: Citología s . Policrómica que usa hematoxilina de Harris + 3 colorantes básicos (naranja G, verde azul, pardo Birsmark, eosina alcohólica...). A denocarcinoma de endocérvix (citoplasma ros a ) y adenocarcinoma endometrial (citoplasma azul).
-May-Grünwald-Giemsa: M aterial secado al aire por PAAF. 2 coloraciones sucesivas: MG y Giemsa. Resalta detalles del citoplasma como presencia de vacuolas, gránulos de mucina, colágenos. Produce metacromasia.
4.2. Coloraciones extemporáneas ("intras")
-Azul de Unna: 15 seg legible.Monocro.Morfología.
-Giemsa: metanol 1-2 min + Giemsa 2 min.
-Vi tales con rojo neutro al 1/1000 - 1/500
-V ital Azul de metileno al 1%
M. directo: Muestra rica en células y con poco líquido. Directamente a frotis. Ej: PAAF, hisopos, asa de platino...
M. indirecto: Muestras líquidas pobres en células. Necesario centrifugar. Ej: Esputos, orina, aspirados bronquiales...
Se agrupan en 4 categorias:
-Estudio de células atípicas en secreciones líquidas
-Estudio de células atípicas después de raspado de mucosas
-Estudio de células tras una PAAF (célu l as en suspensión)
-Estudio de células de piezas operatorias ("intra")
2. Preparación de la muestra para estudio citológico
2.1. Tipos de muestra según procedencia
-Procedentes de líquidos fisiológicos (sangre, orina, LCR...)
-Procedentes de líquidos patológicos (pleura, peritoneal...)
-Procedentes de frotis legrados (frotis vaginal ó bronquial)
-Piezas operatorias
2.2. Preparación general de la muestra
Frotis fijados: Ya extendidos, fijados (citospray) e identificados. Directos a tinción. Ej: Secreciones mama
Frotis secados al aire: Ya extendidos, secados al aire e identificados. NO fijados. Tinción Romanowsky: 30 min a 110ºC + mezcla recién preparada de azul de metileno saturada y de eosina al 1%.Resultados: Núcleos violetas, eritrocitos rojos y Plasmodium azul
Muestras no fijadas ni secadas: Muestras frescas en forma de fluido, líquido o semisólido. Ej: Orina, esputos, LCR... Su procesamiento puede ser:
-Extensión directa: Muestras mucosas. Identificación de portas, aspecto macro, selección zonas patológicas y extender en los portas. Fijar con etanol 96% para Papanicolau o dejar secar al aire para Romanowsky, Giemsa o Diff-Quick.
-Centrifugación: Muestras seromucosas y líquidos serosos. Aspecto muestra, agitar muestra y verter en dos tubos de centrífuga, centrifugar a 2000rpm 5 min, quitar sobrenadante, resuspender las células y al porta
-Citocentrifugación: Citospyn. Tubo especial con forma de cono con orificio situado en un filtro. Junto al filtro el portaobjetos. Centrifugar a 1000-1500rpm 5 min. Retirar porta y fijar o dejar secar. P ara muy bajo nº de células en grande volúmenes.
-Filtros de membrana: Para orina, LCR, sinovial...Mejor que citocentrigugación. Filtro de mb con pors de 8-10 ì m. Más usado son Milipore (acetato de celulosa) y Nucleopore (policarbonato). Sobre todo filtros SM de 1 ó 2 ì m a 5 ì m. 80% poros. Se puede estimar el nº de células cancerosas por volumen de líquido dado. Filtrado a presión atmosférica o presión negativa de 25 mm Hg. Fijar con etanol º media.
3.1. Tipos de fijadores
-Fijadores alcohólicos: Rápidos aunque volátiles e inflamables:1. Etanol 96% para Papanicolau. 15-20 min. Ácido acético 2.5% para lisar hematíes. Para valoración homonal no añadir ácido acético. 2. Metanol 100%. 3. Propanol 90% 4. Alcohol-éter
-Líquido de Carnoy:
-Citospray: Aerosol de alcohol isopropílico + polietilglicol. Antes de teñir pases sucesivos de 5-10 min por etanol 96%.
4.1. Coloraciones para estudios citológicos
-Papanicolau: Citología s . Policrómica que usa hematoxilina de Harris + 3 colorantes básicos (naranja G, verde azul, pardo Birsmark, eosina alcohólica...). A denocarcinoma de endocérvix (citoplasma ros a ) y adenocarcinoma endometrial (citoplasma azul).
-May-Grünwald-Giemsa: M aterial secado al aire por PAAF. 2 coloraciones sucesivas: MG y Giemsa. Resalta detalles del citoplasma como presencia de vacuolas, gránulos de mucina, colágenos. Produce metacromasia.
4.2. Coloraciones extemporáneas ("intras")
-Azul de Unna: 15 seg legible.Monocro.Morfología.
-Giemsa: metanol 1-2 min + Giemsa 2 min.
-Vi tales con rojo neutro al 1/1000 - 1/500
-V ital Azul de metileno al 1%